Exonuclease VII試劑來(lái)源于大腸桿菌，從 5' -3' 和 3'-5'方向切割單鏈 DNA，對(duì)線性或環(huán)狀雙鏈 DNA 沒(méi)有活性。

當(dāng) PCR 完成時(shí)，可以使用核酸外切酶 VII 去除寡核苷酸引物，然后再使用不同的引物進(jìn)行下一步 PCR

。核酸外切酶 VII 消化單鏈 DNA 時(shí)，無(wú)需金屬離子。 本產(chǎn)品是通過(guò)重組表達(dá)核酸外切酶 VII 基因（XseA 和 XseB）

而得高純度蛋白。

組分

名稱(chēng)數(shù)量

Exonuclease VII (10 U/μl)25 μl/250 μl

10X Exonuclease VII Buffer1 ml/1 mlx5

單位定義

在 50 μl 反應(yīng)體系中，37℃ 條件下，30分 鐘內(nèi)能催化產(chǎn)生 1 nmol 酸溶性核苷酸所需的酶量定義 為一個(gè)活性單位。

應(yīng)用

PCR后去除多余引物

PCR后去除硫代磷酸化寡核苷酸引物

去除雙鏈DNA中的單鏈DNA

1X Exonuclease VII Buffer

50 mM Tris-HCl (pH 8), 50 mM Na3PO4, 8 mM EDTA , 10 mM 2-mercaptoethanol。

熱失活

95℃ 10min

酶保存液

50 mM Tris-HCl (pH 8.0), 0.1M NaCl, 1 mM DTT, 50% Glycerol.

儲(chǔ)存

置于-20°C，可保存2年。

Exonuclease VII試劑恒溫?cái)U(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測(cè)結(jié)果，可以看到檢測(cè)反應(yīng)<20min(達(dá)平臺(tái)期)。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。OG變色法為終點(diǎn)變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽(yáng)性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類(lèi)型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測(cè)結(jié)果。

應(yīng)用實(shí)例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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