Western一抗二抗通用稀釋液試劑稀釋液用于做Western blot實(shí)驗(yàn)時一抗或者二抗的稀釋，稀釋液中添加了多種抗體保護(hù)劑，可以增加抗體的活性和穩(wěn)定性，減少抗體的非特異性結(jié)合，降低非特異性的背景著色，提高試驗(yàn)的特異性和靈敏度。用本稀釋液稀釋的一抗或者二抗使用后，可放在4℃或者-20℃保存，并且可以反復(fù)多次使用，節(jié)約您寶貴的抗體。按照每個一抗稀釋10ml計(jì)算，該Western一抗稀釋液可以稀釋10個或10次Western Blot雜交實(shí)驗(yàn)。該制品中不含有抑制熒光顯色或HRP顯色的成分。

儲存

-20℃可保存3年。開始使用后請于4℃保存，有效期為1年。

使用方法

1. 進(jìn)行一抗孵育雜交 參考所用的一抗說明書，以及樣品中目的蛋白的含量，使用本抗體稀釋液按照適當(dāng)比例稀釋一抗，如1:1000、1:500等，一抗稀釋后即可直接用于Western blot實(shí)驗(yàn)（室溫孵育雜交1h或4℃雜交過夜）。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，可以回收稀釋的一抗，4℃或-20℃ 保存，以用于下次的Western blot實(shí)驗(yàn)。

2. 進(jìn)行二抗孵育雜交 進(jìn)行完一抗孵育后，TSBT溶液洗滌膜1~2次，同樣參考二抗說明書，使用本抗體稀釋液，進(jìn)行二抗的稀釋，并進(jìn)行二抗的孵育雜交（通常二抗雜交時間為室溫30min即可）。雜交完畢后TBST洗滌膜3~4次，并進(jìn)行下游顯色。

Western一抗二抗通用稀釋液試劑恒溫擴(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測結(jié)果，可以看到檢測反應(yīng)<20min(達(dá)平臺期)。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。OG變色法為終點(diǎn)變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測結(jié)果。

應(yīng)用實(shí)例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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