Tli (exo-) DNA Polymerase(5U/ul)試劑聚合酶【又名Vent (exo-) DNA 聚合酶】其來(lái)源于Thermococcus litoralis，經(jīng)基因工程改造而得，去除了3′-5′核酸外切酶校讀活性，其保真度有所降低，大約比Taq DNA聚合酶高2倍。該酶在95℃溫育1小時(shí)后，仍具有90%以上的聚合酶活性。Tli (exo-) DNA Polymerase 與Vent (exo-) DNA Polymerase性質(zhì)和使用方法相同，純化自重組E. coli菌株，其攜帶D141A/E143A突變。該產(chǎn)品是高溫雙脫氧終止法測(cè)序反應(yīng)和高產(chǎn)量引物延伸反應(yīng)的。

主要特征和應(yīng)用

引物延伸

高溫環(huán)狀測(cè)序

高溫雙脫氧測(cè)序

單位定義

一個(gè)活力單位即在在72°C條件下，30分鐘內(nèi)催化10 nmol dNTP的摻入反應(yīng)成為酸不溶性物質(zhì)所需的酶量。

儲(chǔ)存

-20℃可保存2年。

Tli (exo-) DNA Polymerase(5U/ul)試劑恒溫?cái)U(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測(cè)結(jié)果，可以看到檢測(cè)反應(yīng)<20min(達(dá)平臺(tái)期)。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。OG變色法為終點(diǎn)變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽(yáng)性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測(cè)結(jié)果。

應(yīng)用實(shí)例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。