細胞名稱：小鼠腦微血管內(nèi)皮細胞株bEnd.3ATCC

細胞代次：P4

細胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運輸費）

細胞凍存：無血清凍存液

細胞傳代：第一次建議1:2

1、您收到細胞后，請按照以下方法進行操作：

取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài)，然后換用新鮮*培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進行傳代。

2、細胞傳代：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.25%Y蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀細胞用12ml*培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進行分瓶傳代，zui后放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）待細胞*貼壁后，觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進行換液培養(yǎng)或傳代。

3、細胞凍存：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.25%Y蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉(zhuǎn)入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。

4、細胞復蘇：

1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2）將凍存管中的細胞移至含5ml*培養(yǎng)基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀用5ml*培養(yǎng)基重懸，接種25cm2培養(yǎng)瓶，于37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）第二天，換用新鮮*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

原代細胞與細胞系有什么區(qū)別？細胞培養(yǎng)物來源于原代外植體或分散的細胞懸液。通常在這樣的培養(yǎng)物中細胞增殖形成匯合地單層細胞或密集地細胞懸液。根據(jù)傳統(tǒng)定義，*次收獲和接種的細胞被稱為原代細胞[Freshney, R.I. (1987). Culture of Animal Cells. A Manual of Basic Technique. (New York, Alan R. Liss, Inc.)]. 這類細胞生命周期有限，在有限的生命周期內(nèi)需掌握好細胞zui大的生長空間，以保持細胞群中基因型和表型的*性。細胞系是不斷生長，分化的細胞群，因其經(jīng)過遺傳改造，致使其具有無限增長的潛能。體外生長的細胞系用于醫(yī)療或科研。實際上，連續(xù)細胞系可以用大量次培養(yǎng)基培養(yǎng)，隨著代數(shù)的增加細胞的基因型和表型都有可能發(fā)生改變。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。

1、倍增和代數(shù)有什么區(qū)別？倍增是培養(yǎng)物中細胞總數(shù)加倍，通常是指細胞指數(shù)或?qū)?shù)生長期。代數(shù)是指細胞群從培養(yǎng)瓶中移出，傳代培養(yǎng)過程的次數(shù)，傳代培養(yǎng)的目的是使細胞處于低密度以刺激其進一步生長。

2、接收到的凍存細胞該如何處理？收到包裝箱后，立即將凍存細胞從干冰移入液氮中凍存。此過程盡量快以避免升溫。不要將細胞儲存在-80℃，這樣會對細胞造成不可挽回的傷害。

3、有多少經(jīng)驗才能開始正常人類細胞培養(yǎng)？推薦有經(jīng)驗者在無菌環(huán)境下用層流凈化罩工作，如果有經(jīng)驗的話對其它細胞類型也是很有利的。如果你是細胞培養(yǎng)的初學者或打算建立細胞培養(yǎng)實驗室，我們會為你提供幫助。請的細胞培養(yǎng)專家。

售后服務告知書

1）細胞出現(xiàn)問題，可重發(fā)的情況有哪些？判定標準是什么？

1. 細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴重漏液等，重發(fā)；

2. 細胞污染問題，請在收到產(chǎn)品48小時內(nèi)，給我們提出真實的實驗結(jié)果，核實后重發(fā)；

3. 常溫發(fā)貨的細胞靜置24小時后，干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇后24小時后，絕大多數(shù)細胞未存活，（需提供真實清晰的細胞狀態(tài)照片），重發(fā)；

4. 干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇后24小時后或常溫發(fā)貨的細胞靜置4小時候并且未開封，出現(xiàn)污染，重發(fā)；

5. 細胞活性問題，請在收到產(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，核實后予重發(fā)；

6. 細胞收到當天以及第2,3天請拍照，3天未告知的，視為產(chǎn)品合格。4-7天內(nèi)出現(xiàn)問題有提供收到細胞前3天照片和細胞出現(xiàn)問題時照片以及細胞相關(guān)操作的詳細步驟的，并跟技術(shù)人員溝通的，由技術(shù)人員判定為我方責任的，重發(fā)。技術(shù)人員判定為雙方承擔責任的由雙方進行協(xié)商處理或者按合同價的50%收費重發(fā)。

二）細胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？

1. 客戶造成細胞污染，不重發(fā)；

2. 客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；

3. 非本庫推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；

4. 細胞狀態(tài)不好，未提供細胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；

5. 細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；

6. 細胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；

7. 視具體情況而定。

YS4483C人非小細胞肺腺癌細胞NCI-H2087

YS4484C小鼠腦微血管內(nèi)皮細胞株bEnd.3

YS4485C人肺鱗癌細胞NCI-H2170

YS4486C人非小細胞肺癌細胞NCI-H2347

YS4487C肺支氣管鱗狀細胞癌KNS62

YS4488C人腦星形膠質(zhì)母細胞瘤U-118 MG

YS4489C人肺腺癌細胞HCC95

YS4490C人肺腺癌細胞HARA

YS4491C人肺腺癌細胞EPLC272H

YS4492C人急性淋巴細胞性白血病細胞REH

YS4493C人橫紋肌肉瘤細胞A-204

YS4494C人乳腺癌細胞SUM159PT

YS4495C小鼠肝細胞AML12

YS4496C人胚腎上皮包裝細胞GP2-293

YS4497C非小細胞肺癌細胞NCIH810

YS4498C類濾泡狀甲狀腺癌細胞，肺轉(zhuǎn)移FTC238

YS4499C胃癌細胞SNU-719

YS4500C胃癌細胞IM95m

YS4501C胃癌細胞OCUM-1

YS4502C大鼠骨髓瘤細胞IR983F

YS4503C人腎小管上皮細胞HKC

YS4504C非霍奇金淋巴瘤Karpas422

YS4505C骨髓白血病細胞MOLM16

YS4506C小細胞肺癌細胞NCIH196

YS4507C非小細胞肺癌腺癌細胞NCIH1793

YS4508C白血病細胞NOMO-1

YS4509C急性髓系白血病細胞OCIAML3

YS4510C急性粒細胞白血病OCIM2

YS4511C人非小細胞肺癌細胞NCI-H23

YS4512C人小細胞肺癌 NCI-H2227

YS4513C小鼠骨肉瘤成骨細胞K7M2-WT

YS4514C伯基特淋巴瘤Namalwa

YS4515C肝癌細胞SNU475

YS4516C小鼠胚胎成纖維細胞C3H/10T1/2, Clone 8

YS4517C人肺腺癌細胞HCC4006

YS4518C骨髓漿細胞瘤AMO1

YS4519C多發(fā)性骨髓瘤細胞L363

YS4520C肺癌細胞（大細胞肺1癌）CORL23

YS4521C非小細胞肺癌細胞CAL12T

YS4522C非小細胞肺癌細胞NCI-H2122

YS4523C人胚肺細胞NCI-H1563

YS4524C非小細胞肺癌細胞NCIH1838

YS4525C非小細胞肺癌細胞NCIH2110

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